Исследование используется для определения антигенов
H. pylori
в образцах кала методом иммунохроматографии с целью диагностики инфекции
H. pylori.
Тест рекомендован многочисленными международными консенсусами, высокоинформативный метод, является ”золотым стандартом” в диагностике хеликобактериоза, используется для первичной диагностики и для контроля за проведенной антихеликобактерной терапией.
Одним из самых перспективных неинвазивных методов подтверждения хеликобактерной инфекции (являющейся в т.ч. фактором риска различных онкозаболеваний желудочно-кишечного тракта и др.) считается определение антигенов возбудителя в кале. Метод
высокочувствительный и специфичный (около 90 %), малоинвазивен, прост в применении.
Применение теста особенно удобно в педиатрии.
Преимущества метода:
1. Неинвазивный метод (диагностика без использования фиброгастроскопии).
2. Детекция как активных, так и кокковых форм бактерии.
3. Высокая точность, чувствительность и специфичность (до 95-98%).
4. Длительное хранение образцов без потери информативности, а так же возможность транспортировки.
5. Метод рекомендован 3-я международными (Маастрихтскими) соглашениями по диагностики и лечению хеликобактериоза, российской гастроэнтерологической ассоциацией и российской группой по изучению Helicobacter pylori как наиболее точный и удобный для пациента.
6. Используется у взрослых и детей.
7. Не требуется предварительной подготовки.
Бактерии вида Helicobаcter pylori являются причиной возникновения большинства гастритов, до 80% случаев язвенной болезни желудка и до 90% язвенной болезни двенадцатиперстной кишки. Считается, что во всем мире инфицировано более половины населения, а в России - более 80% жителей.
Хеликобактериоз – это широко распространенное инфекционное заболевание с оральным, фекально-оральным и контактным путем передачи возбудителя, сопровождающееся преимущественным поражением антрального отдела желудка, двенадцатиперстной кишки. Источником инфекции является больной человек или бактерионоситель, а наиболее чувствительны к ней люди с иммунодефицитами. Инкубационный период составляет около семи дней.
Возбудителем инфекции является Helicobacter pylori – спиралевидная грамотрицательная бактерия, способная инфицировать желудок и двенадцатиперстную кишку. Helicobacter pylori вызывает лишь предрасположенность к гастриту и язвенной болезни, и только при дополнительных факторах – группе крови О(I), наследственной предрасположенности, курении, злоупотреблении алкоголем, приеме ульцерогенных лекарственных препаратов, частых стрессах, неполноценном питании – возникает язвенный дефект.
В настоящее время доказано, что хеликобактерная инфекция повышает риск рака желудка. Более половины населения в мире являются носителями Helicobacter pylori, однако у большинства носителей нет никаких симптомов, и лишь примерно у 15 % из них возникает гастрит или язвенная болезнь.
Правила подготовки к исследованию:
- Не требуется предварительной подготовки.
Диагностика очень важна, она достоверно устанавливает наличие или отсутствие бактерии в организме человека и позволяет определиться с тактикой лечения, если патоген был выявлен. Не менее важно уметь интерпретировать результаты проведённых обследований.
Расшифровка — это заключение, которое выдаёт врач после проведённого обследования, результат проводимых манипуляций.
Если доктор говорит о том, что отрицательные – это означает, что бактерии в организме не обнаружено. Пациент здоров. И наоборот, положительный результат свидетельствует об инфицированности.
Каждый метод исследования имеет свои специфические нормы и пределы, по которым производится оценка наличия патогенного микроорганизма или его отсутствия, некоторые анализы позволяют выявить степень заражённости и стадию активности жизнедеятельности бактерии.
Как разобраться во врачебных заключениях проведённого обследования? Расшифруем результаты каждого метода диагностики Н.руlori.
Норма анализа на хеликобактер пилори
В организме как взрослых, так и детей данной бактерии быть не должно. Поэтому нормой для любого анализа на этот микроб будет отрицательный результат:
- Отсутствие самой бактерии при проведении исследования мазков слизистой желудка под микроскопом. Глаз врача диагноста под многократным увеличением не выявляет S-образных микробов cо жгутиками на конце тела.
- Не будет окрашивания в малиновый цвет индикатора в тест-системе при проведении уреазного теста. После того, как биоптат слизистой поместят в среду экспресс-набора, ничего не произойдёт: цвет индикатора останется первоначальным (светло-желтым или другим, который заявлен производителем). Это норма. При отсутствии бактерии некому разлагать мочевину, превращая её в аммиак и углекислый газ. Не происходит защелачивание среды, к которой чувствителен индикатор.
- Менее 1% меченого изотопа 13С в выдыхаемом воздухе фиксируется при . Это означает, что ферменты хеликобактера не работают и не расщепляют мочевину, выпитую для исследования. А если ферменты не обнаружены, можно сделать вывод об отсутствии и самого микроорганизма.
- Нет роста колоний на питательных средах при проведении бактериологического метода. Важным составляющим успеха данного анализа является соблюдение всех режимов выращивания микроба: кислорода в среде должно быть не более 5%, используется специальный кровяной субстрат, поддерживается оптимальная температура. Если на протяжении пяти дней на среде не появились мелкие круглые бактериальные колонии, можно сделать вывод, что микроба в исследуемом биоптате не было.
- Отсутствие антител к патогену при проведении иммуноферментного анализа крови или низкий их титр 1:5 и менее. Если титр повышенный – хеликобактер в желудке присутствует. Антитела или иммуноглобулины (IgG, IgM, IgA) — это специфические белки иммунной системы, вырабатываемые с целью защиты от микроба и повышения сопротивляемости организма.
Если анализ на хеликобактер пилори положительный — что это значит
Положительный результат анализа означает наличие инфекции в организме. Исключение составляет положительный результат на титр антител, который может возникать при проведении ИФА крови сразу после эрадикации бактерии.
Вот в чем дело:
Даже если пройдено успешно, и бактерии больше нет в желудке, некоторое время антитела или иммуноглобулины к ней сохраняются и могут давать ложноположительный результат.
Во всех других случаях, положительный анализ означает присутствие микроба в желудке: бессимптомное носительство или болезнь.
Расшифровка цитологического исследования на хеликобактер
Исследование бактерии под микроскопом из мазков желудочной слизистой называется цитологическим. Для визуализации микроба мазки окрашивают специальным красителем, а затем рассматривают их под увеличением.
Если доктор наблюдает в мазках всю бактерию целиком,он дает заключение о положительном результате анализа. Пациент заражён.
- + если видит до 20 микробов в поле зрения
- ++ до 50 микроорганизмов
- +++ более 50 бактерий в мазке
Если врач в цитологическом заключении сделал отметку в один плюс — это означает хеликобактер-слабоположительный результат: бактерия есть, но обсеменённость слизистой желудка не значительная. Три плюса свидетельствуют о значительной активности бактерий, их очень много и процесс воспаления выражен.
Расшифровка уреазного теста
Результаты экспресс-теста на фермент бактерии уреазу тоже основан на количественном принципе. Врач дает положительную оценку при изменении индикаторной окраски, скорость и степень её проявления выражает плюсами: от одного (+) до трёх (+++).
Отсутствие окраски или появление её спустя сутки означает, что пациент не страдает хеликобактериозом. Результаты анализа в норме. Когда уреазы, выделяемой Н.руlori много, она очень быстро расщепляет мочевину и образует аммиак, который защелачивает среду экспресс-панели.
На изменение среды активно реагирует индикатор и становится малиновым. Отсутствие окраски или появление её спустя сутки означает, что пациент не страдает хеликобактериозом. Результаты анализа в норме.
Чем больше в заключении уреазного теста плюсов, тем выше инфицированность:
- Хеликобактер 3 плюса
Если окрашивание в малиновый цвет наблюдается в течение нескольких минут часа – врач сделает отметку в три плюса (+++). Это означает значительную инфицированность микробом.
- Хеликобактер 2 плюса
Если при проведении уреазного теста, окрашивание в малиновый тест индикаторной полоски происходит в течении 2 часов – это означает, что заражение человека данным патогеном умеренное (два плюса)
- Хеликобактер 1 плюс
Изменение цвета индикатора до 24 часов оценивается в один плюс (+), что свидетельствует о незначительном содержании бактерий в слизистом биоптате и расценивается как слабоположительный результат.
Отсутствие окраски или появление её спустя сутки означает, что пациент не страдает хеликобактериозом. Результаты в норме.
АТ к Helicobacter pylori — что это
Антитела или иммуноглобулины – это специфические соединения белковой природы, циркулирующие в крови человека. Они вырабатываются иммунной системой в ответ на проникновение инфекции в организм.
АТ вырабатываются не только в отношении конкретного патогена, но и ко многим другим агентам вирусной и бактериальной природы.
Повышение количества антител – их титра свидетельствует о развивающемся инфекционном процессе. Иммуноглобулины могут также сохраняться какое-то время и после уничтожения бактерии.
Выделяют несколько классов антител:
Helicobacter pylori IgG — количественная расшифровка анализа
Антитела к хеликобактер пилори (anti Helicobacter pylori в англоязычной литературе), относящиеся к классу иммуноглобулинов G появляются в крови не сразу после инфицирования микробом, а спустя 3-4 недели.
Выявляются антитела иммуноферментным анализом при взятии венозной крови. В норме IgG отсутствуют, либо их титр не превышает 1:5. Если этих белковых фракций нет, можно сказать, что инфекция не присутствует в организме.
Высокие титры и большое количество IgG может свидетельствовать о следующих состояниях:
- Наличие бактерии в желудке
- Состояние после проведения лечения
Даже после полного исчезновения патогена из организма после проведенной терапии, иммуноглобулины долгое время могут циркулировать в крови. Рекомендуется повторный ИФА-анализ с определением АТ проводить спустя месяц после окончания лечения.
Отрицательный тест может давать ложноположительные результаты: титр антител повышается с небольшим опозданием около месяца от момента заражения.
Человек может инфицироваться данным патогеном, но при проведении ИФА титр будет низкий – это может означать, что заражение произошло недавно, сроком до 3 недель.
IgG к хеликобактер пилори — какая норма
Нормы и титры IgG, их количественная характеристика зависит от методик определения и реактивов конкретной лаборатории. Нормой является отсутствие IgG при исследовании крови методом иммуноферментного анализа, либо его титр 1:5 и ниже.
Не стоит ориентироваться в постановке диагноза «хеликобактериоз» лишь на высокие титры антител. Они могут циркулировать в крови некоторое время после излечения, а также «запаздывать» в сроках появления при инвазии патогеном.
Метод ИФА и определение титра антител служит скорее вспомогательным методом, дополняющим более точные: цитологический, уреазный тест.
Хеликобактер пилори титр 1:20 – что это значит
Титр к иммуноглобулинам класса G 1:20 указывает на положительный результат анализа – инфекция в организме есть. Это достаточно высокий показатель. Считается, что цифры от 1:20 и выше указывают на существенную активность воспалительного процесса, который требует лечения.
Уменьшение титра после лечения – хороший прогностический показатель эрадикационной терапии.
Helicobacter pylori IgM и IgA — что это
Иммуноглобулины класса М – это белковые фракции, которые раньше всех реагируют на заражение бактерией, и появляются в крови раньше других.
Положительный анализ на IgM возникает, когда титры данной фракции антител нарастают. Это происходит при инфицировании. IgA в крови обнаруживается, если хеликобактерный процесс достаточно активен и слизистая желудочная оболочка крайне воспалена.
В норме в здоровом организме иммуноглобулины данных классов либо отсутствуют, либо содержаться в несущественных количествах, которые не имеют диагностической значимости.
Анализ кала на хеликобактер ─ это один из видов диагностики, который подтверждает или опровергает наличие бактерий в организме. Его также проводят для контроля лечения. Тест кала на хеликобактер пилори ─ это неинвазивный (не требующий использования эндоскопии) метод, анализирующий биоматериал.
С диагностикой хеликобактер пилори связано два термина ─ «чувствительность» и «специфичность», на их основании делается заключение анализа.
Чувствительность ─ это способность методики давать положительный результат. Так определяется процент выявления инфекции из общего количества проведенных тестов. Этот параметр посчитать довольно просто.
Специфичность ─ это способность диагностики не давать ложноположительных результатов при отсутствии бактерий. Этот параметр определяет процент отрицательных ответов в группе здоровых людей.
Важно! Язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки ─ абсолютный показатель для диагностики.
В каких случаях назначают делать этот анализ:
- Заболевания, относящиеся к онкологическим или предопухолевым. Важное значение анализ имеет при лимфоме желудка, так как на ранних стадиях проводят только антибактериальное лечение без применения химиотерапии.
- Атрофический гастрит.
- Хронический хеликобактерный гастрит с развитием кишечной метаплазии (замещением желудочного эпителия кишечным).
- Дисплазия желудка ─ нарушение анатомических и функциональных свойств эпителия органа.
- Наличие семейного анамнеза рака желудка, особенно при онкологическом заболевании у родственников первой линии (родители - дети), у которых этот диагноз был доказан.
- Болезнь Менетрие ─ хронический гастрит, для которого характерна значительная гипертрофия слизистой оболочки с последующим образованием кист и аденом. Она является предраковой патологией, поэтому возникает потребность дополнительно исследовать кал на инфекцию хеликобактер пилори.
- Устойчивая функциональная диспепсия более шести месяцев, особенно при болях в эпигастральной области.
- Подготовка к длительному применению нестероидных противовоспалительных препаратов, ацетилсалициловой кислоты.
- У пациентов, которые вынуждены длительно употреблять ингибитор протонной помпы (при болезнях пищевода, для профилактики гастропатии).
- Заболевания крови ─ тромбоцитопеническая пурпура, идиопатическая железодефицитная анемия.
- Метод автоматизирован, и участие человека в процессе исследования минимальное.
- Диагностическая ценность метода достаточно высока (до 98%).
- В условиях современной лаборатории не дает ложноположительных результатов.
Недостатки:
- Отрицательный результат анализа не исключает наличия возбудителя в организме.
- Универсальность тест-системы бывает ограничена в связи с разновидностью штаммов бактерий.
- Результаты исследования биоматериала сложно стандартизировать. Практически невозможно выровнять количество исследуемого материала для сравнения разных образцов между собой.
- Результаты ПЦР не могут быть окончательными и основополагающими при постановке диагноза.
Бактериологический посев
Анализ на бакпосев h. pylori представляет собой сложный, трудоемкий процесс. Для выращивания живой культуры требуются специальные условия. Как правило, подобные исследования проводят в научно-исследовательских центрах или учебных заведениях, имеющих клиническую лабораторию.
Посев не является 100%-но специфичным методом. Хеликобактер часто невозможно высеять, так как сдать биологический материал правильно не всегда удается. Он может не содержать колонии культивируемого микроорганизма. Также бактерии погибают при нарушении правил сбора материала или его транспортировки.
Поэтому данный метод применять для диагностики нецелесообразно. Его используют для научных экспериментов.
ИХА кала (иммунохроматографический анализ)
Это иммунохимический метод, основ
анный на распределении исследуемого образца между неподвижной и подвижной фазой и на свойстве антител связываться с антигеном избирательным образом.
Подвижная фаза, содержащая анализируемый материал, перемещается через неподвижную. При этом многократно повторяются акты сорбции (поглощения) и десорбции (выделения). Так происходит идентификация вещества (бактерий).
Преимущества:
- простота и удобство, метод не требует дорогостоящего оборудования;
- достоверность тестов - 99%;
- доступность (более экономичный метод в сравнении с ИФА).
К недостаткам методики можно отнести тот факт, что результат анализа зависит от качества моноклональных антител, которые используют при производстве тест-систем, а также от концентрации бактерий в биоматериале, которые не всегда могут обнаруживаться.
Правила забора материала
Чтобы итоговые показатели анализа были достоверными, нужно знать, как правильно сдавать пробу.
Биоматериал собирают в чистую сухую емкость. В нем не должно содержаться примесей мочи или крови. Оптимальный вариант, если кал собран утром, перед доставкой в лабораторию. Если такой возможности нет, то можно взять и вечернюю пробу. При этом ее нужно хранить не более 10 часов в холодильнике при температуре, не превышающей 8 °C.
Перед тем как сдавать кал, за 72 часа до исследования следует отменить прием лекарственных препаратов. При нарушении перистальтики, наличии запоров пациенту назначается мягкое слабительное (лактулозу) для предупреждения ложного результата.
Для контроля лечения инфекции h. pylori анализ кала проводят не раньше чем через месяц после окончания антибактериальной терапии.
Классификация методов выявления инфекции Нelicobacter pylori представлена в таблице.
Инвазивные методы требуют проведения эндоскопического исследования (ФЭГДС) с биопсией и дальнейшим изучением гастробиоптатов. Неинвазивные методы эндоскопического исследования не требуют.
Гистологический метод
Гистологический метод исследования биоптатов СОЖ — микроскопия окрашенных различными способами (гематоксилин-эозином, по Гимзе, толуидиновым синим, по Вартину-Старри) мазков-отпечатков гастробиоптатов. Этот метод позволяет определить выраженность воспаления СОЖ, наличие атрофии, кишечной метаплазии и наличие (степень обсемененности) НР.
Быстрый уреазный тест (Хелпил-тест)
Быстрый уреазный тест (Хелпил-тест) — определение HР по уреазной активности микроорганизма в биоптатах СОЖ. Helicobacter pylori продуцирует уреазу, под влиянием которой происходит гидролиз мочевины с образованием иона аммония. При этом увеличивается рН среды, что можно зафиксировать с помощью изменения цвета индикатора. Гастробиоптаты помещают в раствор, содержащий мочевину и индикатор, изменение цвета которого косвенно свидетельствует о наличии HР.
Молекулярно-генетический метод — ПЦР в биоптате
Молекулярно-генетический метод исследования биоптатов СОЖ с помощью ПЦР позволяет выделять высокопатогенные и низкопатогенные штаммы HР.
Бактериологический метод
Бактериологический метод исследования биоптатов СОЖ: культуральное исследование и определение чувствительности HР к антибиотикам перед терапией первой линии важно проводить в регионах с высокой резистентностью к кларитромицину (более 15-20%), если планируется использовать стандартную трехкомпонентную эрадикационную терапию, одним из компонентов которой является кларитромицин. Бактериологический метод с определением чувствительности к антибиотикам также необходимо применять при неэффективности эрадикационной терапии второй линии.
Исследование кала на наличие антигена HР (ИФА)
ИФА (особенно с применением моноклональных антител) выявления антигена HР в кале является высокочувствительным и специфическим методом как для первичной диагностики инфекции НР, так и для контроля результата лечения.
Серологический метод
Серологический метод (ИФА) — определение антител IgG к HР в сыворотке крови — простой и доступный метод первичного скрининга инфекции. Учитывая, что антитела к HР сохраняются в течение многих месяцев после эрадикации микроорганизма, использование серологического метода не рекомендуется для оценки эффективности проведения эрадикационной терапии.
Уреазный дыхательный тест с 13С-мочевиной
Уреазный дыхательный тест — исследование состава выдыхаемого воздуха после приема раствора мочевины, меченной изотопом углерода (13С). При наличие в желудке обследуемого HР мочевина под действием уреазы, продуцируемой бактерией, подвергается гидролизу до NH4+ и HCO3- с последующим образованием из HCO3- углекислого газа, который, попадая в кровоток, затем выделяется через легкие и может быть определен спектрометром в выдыхаемом воздухе. Этот тест может использоваться как для первичной диагностики HР, так и для оценки эффективности эрадикации.
На фоне инфекции Helicobacter pylori развиваются такие воспалительные заболевания желудочно-кишечного тракта, как язва желудка или двенадцатиперстной кишки, эрозивный гастрит, гастродуоденит.
