Техника определения группы крови при помощи стандартных сывороток. Определение группы крови с помощью стандартных сывороток Определение группы крови по сывороткам

Показания: необходимость переливания крови и ее компонентов.

Необходимые условия: помещение с хорошим освещением и температурой от 15 о до 25 о С.

Оснащение: два комплекта стандартных гемагглютинирующих сывороток I (О), II (А), III (В) групп двух различных серий и одна ампула сыворотки IV (АВ) (в каждую ампулу с сывороткой опускают сухую чистую пипетку), флакон с изотоническим раствором хлорида натрия с пипеткой, чисто вымытая сухая специальная маркированная или фаянсовая тарелка, предметные стекла, стеклянные палочки, стерильные копьевидные иглы для прокола мякоти пальца, стерильные марлевые шарики, спирт, песочные часы на 5 минут.

Этапы	Обоснование
1.Перед началом работы моют руки, одевают стерильные перчатки.	С целью инфекционной безопасности медперсонала при работе с кровью.
2.Проверяют чтобы каждая ампула стандартной сыворотки имела паспорт – этикетку с указанием группы крови, номера серии, титра, срока годности, места изготовления. Ампулой без этикетки пользоваться запрещается. Сыворотка должна быть светлой и прозрачной, ампула сохранной, титр не менее 1:32. Сыворотки располагают в специальных штативах в 2 ряда.	Стандартные сыворотки: I (О) – бесцветная – на этикетке полос нет; II (А) – голубая – на этикетке 2 полосы синего цвета; III (В) – красная – на этикетке 3 полосы красного цвета; IV (АВ) – желтая – на этикетке 4 полосы желтого цвета. Наличие хлопьев, осадков являются признаками непригодности сыворотки. Сыворотки с истекшими сроками хранения к использованию непригодны.
3.На стандартную или поделенную цветным карандашом на 4 квадрата тарелку наносят по одной капле сыворотки двух серий I (О), II (А), III (В) групп.	На тарелке поделенной цветным карандашом необходимо в каждом квадрате указать группу крови. На стандартную или поделенную цветным карандашом на 4 квадрата тарелку наносят по одной капле сыворотки двух серий I (О), II (А), III (В), IV (АВ) для исключения ошибки при чтении результата.
4.Каплю крови из пробирки или пальца наносят пипеткой или стеклянной палочкой или около каждой капли сыворотки (крови должно быть в 10 раз меньше чем сыворотки) и смешивают разными стеклянными палочками или разными уголками предметного стекла.	Для получения крови из пальца подушечку пальца обрабатывают спиртом и делают прокол кожи иглой – копьем. Первую каплю крови снимают марлевым шариком, последующие разными уголками предметного стекла для исключения ложной реакции агглютинации.
5.После смешивания тарелку осторожно покачивают в руках.	Для более быстрой и четкой агглютинации эритроцитов.
6.По мере наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 минуты в каждую каплю сыворотки с эритроцитами, где наступила агглютинация добавляют по 1 капле 0,9% натрия хлорида, покачивая тарелку смешивают и продолжают наблюдение до истечения 5 минут.	При положительной реакции изогемагглютинации хлопья и зернышки из клеившихся эритроцитов не расходятся при добавлении изотонического раствора хлорида натрия и перемешивании. При отрицательной реакции капли сыворотки на тарелке прозрачные, равномерно розового цвета, не содержат хлопьев и зерен.
7.Через 5 минут читают реакцию в проходящем свете. Если агглютинация нечеткая, к смеси сыворотки и крови дополнительно добавляют по одной капле 0,9% раствора натрия хлорида после чего дают заключение о групповой принадлежности; возможны следующие 4 комбинации: а) все три сыворотки в обеих сериях не дают агглютинации. Исследуемая кровь I (О) группы; б)реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой I (О) и III (В) групп исследуемая кровь II (А) групп; в)реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой III (В) группы в обеих сериях и положительная с сыворотками I (О) и II (А) групп. Исследуемая кровь III (В) группы; г) сыворотки I (О), II (А), III (В) групп дают положительную реакцию в обеих сериях. Кровь принадлежит к IV (АВ) группе. Но прежде чем дать такое заключение, необходимо провести реакцию изогемагглютинации со стандартной сывороткой IV (АВ) группы по той же методике. Отрицательная реакция изогемагглютинации позволяет окончательно отнести исследуемую кровь к IV (АВ) группе	а) отсутствие агглютинации во всех каплях указывает на то, что в исследуемой крови нет агглютиногена, т.е. кровь относится к группе I (О); б) наступление агглютинации в каплях с сыворотками О (I) и В (III) указывает на то, что в крови имеется агглютиноген А, т.е. кровь относится к группе II (А); в) наличие агглютинации в каплях с сыворотками группы I (О) и II (А) указывает на то, что в исследуемой крови имеется агглютиноген В, т.е. кровь относится к группе III (В); г) агглютинация во всех каплях указывает на наличие в исследуемой крови агглютиногенов А и В, т.е. кровь относится к группе IV (АВ) однако учитывая, что агглютинация со всеми сыворотками возможна за счет неспецифической реакции, необходимо на тарелку нанести каплю сыворотки IV (АВ) Группы и добавить к ней 1 каплю исследуемой крови в соотношении 10:1 сыворотку и кровь переливают и наблюдают результат в течение 5 минут. Если агглютинация не наступила, то исследуемую кровь относят к IV (АВ) группе.
8.Выявление других комбинаций говорит о неправильном определении групповой принадлежности крови больного.	При слабой агглютинации и во всех сомнительных случаях кровь заново проверяют со стандартными сыворотками других серий.
9.Ошибки при определении групповой принадлежности крови и не выявленной агглютинации могут быть обусловлены: 1) слабой активностью стандартной сыворотки или низкой агглютинабельностью эритроцитов; 2) избыточным количеством исследуемой крови, добавляемой к стандартной сыворотке; 3) замедленной реакцией агглютинации при высокой температуре окружающей среды.	Для избежания ошибок: 1) использовать активные с достаточно высоким титром сыворотки 1:32; 2) соотношение объема исследуемой крови и стандартной сыворотки 1:10; 3) исследование проводишь при температуре не выше 25 о С; 4) оценивать результаты не ранее чем через 5 минут после исследования; 5) строго и тщательно соблюдать все правила исследования.

Задача № 1.

Ребенок 6-ти лет, находится на стационарном лечении с диагнозом «Аскаридоз». При сестринском обследовании медицинская сестра получила следующие данные: жалобы на тошноту, рвоту, боли в области пупка, потерю аппетита, похудание, быструю утомляемость, беспокойный сон, ночные страхи. Болен в течении нескольких недель.

Объективно:Кожные покровы бледные, подкожно-жировой слой недостаточно развит, боль при пальпации в области пупка. Стул со слов мальчика без патологии.

Назначения:

1. Кал на я/глист

2. Анализ крови общий

4. Диета №5

Задания:

1. Выявите, удовлетворение, каких потребностей нарушено и проблемы пациента.

2. Обоснуйте проблемы пациента.

3. Определите цели и составьте план сестринского вмешательства с мотивацией

4. Соскоб на энтеробиоз

Задача № 2.

Пациент предъявляет жалобы на повышение температуры до 39°С, слабость, разбитость во всем теле, мышечные боли, боли в суставах, боли при движении глазных яблок, сухой болезненный кашель, герпетические высыпания на губах.

Объективно: кожные покровы повышенной влажности, на верхней губе герпетические высыпания, гиперемия конъюнктив, слезотечение, гиперемия в зеве, жесткое дыхание в легких. ЧСС-86 в 1 минуту, АД 110/70 мм рт. ст. Печень, селезенка не увеличены. Физиологические отправления без особенностей.

В анализе крови: Л- 4,5*10 9 /л, п/я- 3; с/я- 40; л-52; м-5; СОЭ-18мм/час.

Задание

1. Выявите проблемы пациента, удовлетворение которых нарушено; сформулируйте и обоснуйте проблемы пациента.

2. Определите цели и составьте план сестринских вмешательств с мотивацией.

3. Расскажите правила постановки инсулина.

Во многих случаях скорую медицинскую помощь пострадавшему человеку возможно оказать только при знании принадлежности его крови по классификации АВ0. Ведь бывают ситуации, когда кровотечение невозможно остановить оперативно, и переливание – это необходимая манипуляция для реанимации пациента. В экстренных случаях невозможно узнать группу и резус.

Знание своих характеристик может ускорить оказание медицинской помощи

Так же важно проводить подобные исследования при планировании и во время вынашивания ребенка для определения трансфузионной совместимости и для выявления риска проявления гемолитической болезни у новорожденного, причиной которой становится несовместимость крови матери и плода по системе AB0. Возможные различия могут привести к иммунным конфликтам в организме матери. Поэтому стоит как можно раньше узнать о наличии или отсутствии теоретически возможного заболевания.

Для этого существуют моментальные тесты, позволяющие определить тип крови.

Определение типа крови при беременности – один из важных этапов диагностики

Методы определения

В условиях современной медицины известно несколько методов, по которым возможно определить принадлежность крови к одной из групп:

• диагностика с использованием цоликлона, который выступает в качестве индикатора;
• методика перекрестной реакции;
• эритротест;
• метод стандартных сывороток.

Чаще находит место в исследованиях именно последний из перечисленных способов: использование сыворотки для определения группы крови.

Исследование крови с использованием методики стандартных сывороток

Суть метода на основе сыворотки

Сывороточный метод хорош в тех случаях, когда из-за дополнительных сложностей с определением группы крови (например, иммуно-дефицитный, возрастной фактор) требуется довольно широкий спектр тестов. Сыворотка же способна свести множество измерений к одному.

Под группой в гематологии подразумевается набор антигенов, которые, располагаясь на эритроцитах, определяют их особенности.

Антигены представляют собой огромный ряд веществ с разными свойствами и качественными характеристиками, но классифицируют по двум системам:

• Система AB0. Представляет собой два эритроцитных антигена, объединённых в группы – агглютиногены A и B, плюс два соответствующим им антитела – a (анти-А) и b (анти-B). Их совокупность или же сочетание друг с другом и образует разнообразие известных сегодня групп крови (всего их 4). Отдельно выделяется ряд разновидностей сильных или слабых вариантов одних и тех же антигенов. Например, антиген A1, имеющий концентрацию более 80% или A2, составляющий 20% и так далее. Знание такой теоретической специфики предназначено для предотвращения ошибки в результатах исследования, которая может привести к летальному исходу, так как схема реанимационного лечения будет полностью нарушена, и возможность найти нового донора с соответствующей группой крови не всегда есть.

Строго необходимо переливать кровь, эритроциты и плазму того типа, который отмечен у реципиента, чтобы при переливании не произошла реакция отторжения. В ситуациях особенной экстренности возможно переливание эритроцитов группы 0, у которых отсутствуют групповые агллютиногены.

Таблица по системе АВ0

• Система резус-фактора. Резус-фактор – это еще один антиген, который обозначается латинской буквой D. Он либо присутствует на эритроцитах (любой группы по АВ0), либо нет. В последнем случае человек считается резус-отрицательным. Есть и другие резус-антигены, но они гораздо менее иммуногенны, не вызывают реакции отторжения и поэтому не учитываются.

Определение резус- фактора

Стандартные сыворотки для определения группы крови – это специальные растворы, полученные путем извлечения из донорской крови плазмы с входящими в неё антителами и разведенные добавлением в этот состав изотонического раствора хлорида натрия.

Методика определения показателей

Алгоритм, который обуславливает определение группы крови и резус-фактора стандартными сыворотками, сводится к ряду манипуляций.

Изготовление сыворотки

Самый логичный и общепринятый шаг в процедуре изготовления сыворотки – это отмывание заранее полученной от донора крови для предотвращения попадания в организм реципиента инородных веществ, которые в дальнейшем могут вызвать реакцию, которая послужит причиной для неверного трактования результатов. Далее, путем центрифугирования, плазма крови в очищенном состоянии готова к использованию в изготовлении сыворотки.

Из полученного ранее раствора пипеткой отделяют 1 мл плазмы, после чего он добавляется во вторую емкость, наполненную изотоническим раствором. Необходимо соблюдать строгое соотношение плазмы, равное 1:256. В противном же случае состав крови при последующих исследованиях может быть определён неверно.

Логично отметить, что сыворотки, предназначенные для определения группы крови, разные по составу. Всего для единичного исследования используют три стандартные сыворотки двух серий для каждой группы, различные по цвету:

• I(0) – не имеет окраски,
• II(А) – голубая и III(B) – розоватая.

На одно исследование приходится две сыворотки одного типа: одна считается контрольной, другая же, собственно, служит для самого исследования.

Проведение исследования

Определение группы крови сыворотками проводится строго при температуре 15-25 градусов по Цельсию. Помещение, в котором проводится данное клиническое исследование, должно быть хорошо освещено и быть предназначено именно для таких тестов. Для его проведения потребуется приготовить следующие приспособления и инструменты для измерений:

• продезинфицированную заранее посуду белого цвета;
• гигроскопическую вату,
• карандаш, которым нужно в дальнейшем поделить тарелку на сектора;
• набор из специальных стеклышек и палочек;
• три пипетки;
• непосредственно стандартные сыворотки, представленные 0(I), А(II) и В(III) гр. крови;
• изотонический раствор хлорида натрия, йод и муравьиный спирт для обработки.

Для проведения исследования нужно подготовить несколько инструментов

Исследования для каждой группы проводится отдельной пипеткой для исключения возможных диагностических ошибок.

Как описано ранее, определение группы крови и резус-фактора стандартными сыворотками основывается на реакциях, происходящих с эритроцитами в период проведения исследования. Поэтому очень важно следить за состоянием оборудования и инструментов для теста, категорически избегая попадания на них влаги, которая разрушает структуру кровяных клеток.

Процесс исследования:

• На тарелку, предварительно разделенную на три участка (сектора) карандашом, размещают при помощи пипетки три образца сыворотки разных видов. И помечают рядом с каждой каплей наименование раствора, соответствующего типу крови.
• После того как капля сыворотки размещена на помеченном для неё секторе, пипетку необходимо тут же вернуть в ту же ёмкость, в которой она была ранее.
• Далее идёт обработка пальца перед взятием крови, которая заключается в простом дезинфицировании участка кожи медицинским спиртом. Затем выполняют забор крови посредством укола в мякоть пальца.
• Полученная алая жидкость собирается предметным стеклом или палочкой в количестве трёх капель, которые не должны превышать по размеру величину головки простой швейной булавки. Отобранные капли аккуратно перемещаются на тарелку с остатками сывороток. После данной манипуляции начинают подсчет времени при помощи часов.
• Кровь аккуратно перемешивается с сывороточным раствором в строгих пределах каждого сектора при помощи специальных для каждого отдела стеклянных палочек. Палочки после единичного действия должны сменяться на новые. Проводить повторяющуюся манипуляцию надо до тех пор, пока образующиеся консистенции не приобретут однородный розовый оттенок.
• По истечению пяти минут (время контролируется по часам), когда растворы находятся в состоянии протекании реакции, к ним добавляется изотонический хлорид натрия в количестве одной капли на каждый из секторов. Затем тарелку слегка раскачивают, чтобы образцы крови перемешались с добавленным в него составом, но не слишком сильно, чтобы образцы не смешались между собой.

Подробнее о том, как происходит определение типа крови, рассказывается в представленном ниже ролике:

Результаты исследования

При положительном результате в течение нескольких первых минут, ещё до добавления изотонического раствора, происходит склеивание эритроцитов, которое проявляется в возникновении красных сгустков в реагирующем растворе. В дальнейшем эти зернышки могут, сливаясь друг с другом, образовывать красные «островки». Если же говорить научным языком, это гемагглютинация – процесс склеивания между собой с дальнейшим выпадением в осадок эритроцитов крови.

Если же после проведённых манипуляций розовый цвет раствора остался неизменным, то реакция, что логично, является отрицательной.

Существует ряд закономерностей, которые зависят от комбинаций положительных и отрицательных реакций в сыворотках:

• В случае если положительной реакции нет ни в одном из исследуемых секторов, то это означает, что реципиент имеет кровь группы 0(I).
• Если неизменной осталось состояние сыворотки А(I), а две остальные дали положительную реакцию, это значит, что кровь исследуемого имеет А(II) группу.
• В случае отрицательной реакции только на В(III) из всех трёх говорят, что реципиент имеет ту группу крови, на которую не «пошла», то есть В(III).
• Если же красные зернышки образовались в каждой из трёх жидкостей, то такая кровь относится к AB(IV) группе.

Для удобства запоминания используется либо схема, либо таблица. Возникновение иных комбинаций относят к ошибочным, получившимся из-за погрешностей при проведении исследования.

Результаты исследования

Существует ряд таких погрешностей:

• Неверная концентрация крови, используемой для измерения. Обычно к ложным результатам приводит превышение заданной нормы для добавления к сыворотке.
• Несвежесть взятых образцов сыворотки или их неправильное хранение приводит к малоактивным реакциям с эритроцитами.
• Низкие температуры могут привести к панагглютинации, которая, как правило, тоже проходит очень слабо.
• Неточность временных рамок может привести к подсыханию поверхности сыворотки. То есть результат исследования становится почти не заметен.

Метод проведения исследования на предмет группы крови с использованием стандартных сывороток – самый распространённый среди мгновенных исследований в условиях экстренной необходимости. Это делает его наиболее значимым и уникальным в условиях современной медицины.

Определение группы крови по стандартным сывороткам используется часто (по сравнению с другими методиками). В основе данной техники — содержащиеся в крови агглютинины и агглютиногены в различных комбинациях.

Соединение одноименных агглютиногена и агглютинина сопровождается реакцией агглютинации (однородное пятно распадается на многочисленные мелкие пятна, состоящие из эритроцитов, склеившихся между собой).

Суть метода

При оказании медицинской помощи не всегда удается быстро остановить кровотечение, для переливания требуется определение группы крови, резус-фактора.

Существуют 2 эритроцитных антигена (агглютиногены А и В) и 2 антитела (а и b). Различные комбинации антигенов и антител образуют 4 группы крови.

Данный способ имеет преимущества, т. к. позволяет свести к одному многочисленные измерения.

Методика определения показателей

Определение групп крови по стандартным сывороткам проводится с использованием реактивов, содержащих агглютинины разных групп, вступающих в реакцию с агглютиногенами, находящимися на поверхности эритроцитов.

Чтобы выявить группу крови, достаточно воспользоваться стандартными сыворотками лишь II и III групп. Однако для исключения возможных ошибок с целью дополнительного контроля используют и остальные (I и IV групп).

Изготовление сыворотки

Стандартные сыворотки для определения группы крови получают из донорской крови. С этой целью используют специальную систему: выделяют плазму вместе с находящимися в ней антителами, затем ее разводят изотоническим раствором хлорида натрия.

Помещают 1 мл раствора NaCl 0,9% в пробирку, добавляют плазму (1 мл), взбалтывают состав. Берут 1 мл полученной смеси, переносят в другую пробирку с изотоническим раствором.

Манипуляцию повторяют, пока не получат разведение смеси в пропорции 1:256. Другие разведения не используют, чтобы исключить возникновение ошибки.

Для одного исследования группы крови с помощью стандартных сывороток их требуется 3 (2 серий для каждой группы), отличающихся по цвету:

• I (0) — прозрачная жидкость, флакон снабжен белой этикеткой;
• II (А) — жидкость голубая, флакон с 2 полосами синего цвета;
• III (В) — бледно-розовая жидкость, флакон с 3 розовыми полосками;
• IV(АВ) — желтая жидкость, на этикетке флакона 4 желтые полоски.

На этикетках указаны:

• титр;
• срок годности;
• дата выпуска;
• серийный номер.
• данные об изготовителе.

Проведение исследования

Температура в помещении должна быть в пределах +15…+ 25°С, требуется хорошее освещение.

Используют специальный планшет, имеющий области с пометками. На него наносят каждую сыворотку (берут 2 образца, 1 из них — контрольный, 2 — для диагностики).

Затем рядом с каждой каплей сыворотки размещают каплю крови, смешивая с каждым в отдельности реагирующим раствором. Спустя несколько минут (5-6) анализируют полученные данные:

• если происходит реакция агглютинации — сывороточный тест считается положительным;
• при отсутствии агглютинации тест отрицательный.

Результаты исследования

В случае положительного результата эритроциты склеиваются (в реагирующем растворе образуются красные сгустки).

Если цвет раствора не изменился, реакция считается отрицательной. Есть закономерности, зависящие от комбинаций отрицательных и положительных реакций, происходящих в растворах:

• I(0), если ни в одном образце нет положительной реакции;
• II (А), если в образце II (А) состояние не изменилось, а в 2 остальных оказалась положительная реакция;
• III(В), если только в образце III(В) реакция оказалась отрицательной;
• IV(АВ), если в каждом из 3 образцов реакция оказалась положительной.

Появление других комбинаций связано с погрешностями, возникающими при исследовании.

Использование старых реактивов или неправильное проведение анализа может сопровождаться слабой реакцией. В таких случаях с целью уточнения необходимо сделать тесты с использованием других методик.

Вконтакте

Существует два метода: по стандартным сывороткам (прямая реакция) и стандартным эритроцитам (обратная реакция).

Определение группы крови по стандартным сывороткам

Для определения группы крови по этой методике определяемую кровь смешивают с сывороткой уже известных групп и по наличию или отсутствию агглютинации судят о группе крови. Для определения применяют заранее приготовленные «стандартные сыворотки» крови О (I), А(II), В (III) двух разных серий для каждой группы. На предметное стекло или фарфоровую тарелку наносят по 2 капли стандартных сывороток (предварительно карандашом на стекле отмечают группу сыворотки) попарно из каждой серии.

Сыворотки обязательно берут разными пипетками. Палец исследуемого больного обрабатывают спиртом и производят укол специальной иглой-скарификатором. Берут 6 капель крови (не более булавочной головки каждая) и помещают их рядом на тарелку со стандартными сыворотками. Отдельными стеклянными палочками перемешивают кровь и сыворотки. Через 5 мин к сывороткам добавляют по 1 капле физиологического раствора (для исключения ложной агглютинации).

Результаты исследования:

если агглютинация отсутствует во всех трех парных каплях, то исследуемая кровь принадлежит к первой группе крови О (I);

отсутствие агглютинации с сыворотками О (I) и В(П) говорят о том, что группа крови А (II);

при отсутствии агглютинации с сывороткой группы крови В (III) и при агглютинации с сыворотками О (I) и А (II) следует считать, что группа крови В (III);

агглютинация со всеми тремя сыворотками обозначает принадлежность крови к четвертой группе — АВ (IV).

Определение группы крови по стандартным сывороткам из двух серий производят во избежание ошибок. При агглютинации с тремя сыворотками — AB (IV) группа крови — необходимо провести дополнительное определение с сывороткой AB (IV) группы крови, которая хранится в специальной запаянной ампуле.

В сомнительных случаях исследование повторяют с другими сериями сывороток или производят определение при помощи стандартных эритроцитов.

Определение группы крови по стандартным эритроцитам

На фарфоровую тарелку наносят 3 капли сыворотки, приготовленной из крови реципиента. К сывороткам добавляют по булавочной головке стандартных эритроцитов О (I), А (II) и В (III). Через 5 мин добавляют по одной капле физиологического раствора.

Результаты исследования:

• при отрицательной реакции со стандартными эритроцитами О (I) и положительной со стандартными эритроцитами А (II) и В (III) — группа крови первая;
• при отсутствии реакции агглютинации со стандартными эритроцитами О (I) и А (II) и положительной с эритроцитами В (III) группа крови вторая;
• при отсутствии реакции агглютинации со стандартными эритроцитами О (I) и В (III) и положительной с эритроцитами А (II) группа крови третья;
• при отсутствия реакции агглютинации со всеми стандартными эритроцитами группа крови четвертая.

«Хирургические болезни», С.Н.Муратов

Показания: необходимость переливания крови, подготовка к оперативному вмешательств.

Приготовить: стандартную тарелочку с углублениями; набор стеклянных палочек; изотонический раствор хлорида натрия ; набор гемагглютинирующих сывороток 1, 2, 3, 4 групп двух серий; пипетки; исследуемую взятую из вены или пальца кровь; часы; лотки; перчатки; емкости для отработанного материала; контейнеры с дезинфицирующими растворами.

Подготовка к манипуляции:

1. Медицинская сестра полностью подготовлена к выполнению манипуляции: одета в костюм (халат), маску, перчатки, колпак, сменную обувь.
2. Проверить качество стандартных гемагглютинирующих сывороток по: цветовой маркировке, внешнему виду (светлая, прозрачная); сохранность упаковки, наличию правильно оформленной этикетки.
3. Подготовить все необходимое для выполнения манипуляции.

Выполнение манипуляции:

На белую тарелочку, согласно обозначению, последовательно нанести по одной капле сыворотки 1, 2, 3 групп двух серий. Каждую пипетку немедленно опускать в ту же ампулу (флакон) из которых они были взяты;

С помощью стеклянной палочки нанести рядом с углублениями (6 углублений) по капле исследуемой крови. Капля крови должна быть в 10 раз меньше капли сыворотки;

Отметить время и чистой, сухой стеклянной палочкой перемешать кровь с сывороткой 1 гр., затем другой палочкой 2 гр. и т.д. во всех углублениях;

По мере наступления агглютинации, но не ранее 3 минуты, в те капли, в которых наступила реакция агглютинации добавить по одной капле изотонического раствора хлорида натрия для исключения ложной агглютинации и продолжать наблюдение в течение 5 минут.

Оценка результатов:

а) при положительной реакции в смеси появляются видимые глазом мельчайшие зернышки, состоящие из склеившихся эритроцитов. Мелкие зерна сливаются в крупные зерна, а иногда в хлопья, сыворотка при этом - обесцвечивается;

б) при отрицательной реакции жидкость остается равномерно окрашенной в розовый цвет;

в) возможны 4 комбинации положительной и отрицательной реакции:

1. Если агглютинации нет ни в одной из ячеек, то кровь I (0) группы.

2. Если агглютинация в первой и третей ячейках, то кровь II (А) группы.

3. Если агглютинация в первой и второй группах, то кровь III (В) группы.

4. Если агглютинация в первой, второй, третей ячейках, то кровь IV (АВ) группы.

Для исключения ошибки проверяют кровь с сывороткой 4 группы, где агглютинации не должно быть.

Окончание манипуляции:

1. Снять перчатки, поместить их в дезинфицирующий раствор.
2. Вымыть руки, осушить полотенцем.

Примечание: определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15 - 25 0 С.